小鼠表皮黑色素细胞提取物的应用！


一、背景
小鼠表皮黑色素细胞提取物是从小鼠原代表皮黑色素细胞提取的，小鼠原代表皮黑色素细胞从正常小鼠皮肤组织制备。小鼠表皮黑色素细胞提取物可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。小鼠表皮黑色素细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。
二、生理结构
表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。黑色素细胞是皮肤产生和维持色素的主要细胞，起源于神经嵴，后逐渐迁移到表皮和毛囊。黑色素细胞的异常或功能的失常导致了一系列难治性色素性疾病的发生，如白癜风、黄褐斑等。表皮黑色素细胞主要分布于位于表皮的基底层，与表皮细胞共同组成表皮黑素单位，其主要功能是产生黑素小体保护皮肤免受损害。黑色素细胞是一种皮肤里的特殊的细胞，它产生黑色素，传递给周围的角质形成细胞。黑色素停留在这些角质形成细胞的细胞核上起保护作用，防止染色体受到光线辐射受损。黑色素细胞能合成并分泌黑色素，因此是一种腺细胞。
然而黑色素的生物合成非常复杂，是通过色体（未成熟的黑色素）内酪氨酸酪氨酸酶反应形成的。在正常人体表皮中，一个黑色素细胞大约可以顾及40个角质形成细胞，称为表皮的黑色素形成单位。皮肤的颜色来自于角质形成细胞内存储的黑色素。一般来讲，存储黑色素多的人肤色更深，也更受到保护，远离阳光辐射。医学研究发现,黑色素细胞损伤,会导致黑色素生成不足,从而引发白癜风.主要原理是：黑色素细胞损伤、脱失后，被损伤的黑色素细胞可再释放抗原，刺激机体产生更多的抗黑色素细胞抗体，使更多的黑色素细胞被破坏，因而形成恶性循环，导致大量的黑色素细胞失活，从而在皮肤表面形成形态各异，大小不一的斑点，也就是白癜风。黑色素细胞的研究有利于理解和掌握产生黑色素机制和它的调节，在美容和化妆品领域可以制造新的美白产品，在医学领域可以治疗白化病，白癜风，黑毒肿等疾病等。
三、应用
小鼠表皮黑色素细胞提取物用于黑色素细胞与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程皮肤的初步研究皮肤缺损创面修复是整形外科临床常见问题之一。目前广泛采用自/异体皮肤移植修复皮肤创面缺损,但是这种方法存在着皮肤来源受限、对机体产生二次创伤等缺陷。组织工程皮肤的研发和应用为皮肤缺损修复提供了新的治疗策略。目前已有组织工程化的真皮和全层皮肤等产品上市,然而这些人工皮肤目前仅发挥遮盖创面和加速愈合的功能,尚不是真正意义上的具有色泽、排汗、生发等生物学功能的正常皮肤组织,因而构建具有正常生物学功能的组织工程皮肤是该领域今后需重点关注的研究课题。皮肤中的黑色素细胞对于皮肤色泽的调节以及防止紫外线照射引起的细胞损伤起着重要的作用。以骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）为种子细胞构建组织工程全层皮肤的研究基础上,将黑色素细胞与BMSCs以适合的比例混合培养,并利用Ⅰ型胶原膜为支架材料构建含有色素细胞的组织工程皮肤,为研发具有色素功能的组织工程皮肤提供理论依据。
四、研究方法
1、以包皮组织作为细胞来源,用消化法获得表皮细胞悬液,通过黑色素细胞完全培养基进行培养筛选,并通过低浓度胰酶消化法进行传代培养,然后对其进行DOPA染色、免疫组化检测（S-100蛋白）和透射电镜观察,以及生长曲线的检测;同时进行BMSCs的分离培养,对其表面抗原及其多向分化潜能进行鉴定。
2、构建Ⅰ型胶原膜,筛选适合混合培养黑色素细胞和BMSCs的培养基,确定该两种细胞与Ⅰ型胶原膜复合构建含有黑色素细胞的组织工程皮肤的方案,并通过免疫组化检测（S-100蛋白）和扫描电镜检测构建的组织工程皮肤生物学性状。
3、建立裸鼠背部皮肤缺损动物模型,将体外构建的含有色素细胞的组织工程皮肤移植到裸鼠背部缺损创面,在术后不同时间点获取标本,通过大体标本观察、DAPI体内示踪标记、HE染色、免疫组化检测（S-100蛋白）及透射电镜检测等方法观察组织工程皮肤修复皮肤创面缺损及生成色素情况。
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